超声微泡介导ABCB1a基因siRNA质粒转染的效率及对ABCB1a和P-gp表达的影响

摘要：

目的 研究超声微泡介导ABCB1a基因siRNA质粒转染L2RYC细胞的效率以及对ABCB1a水平和P-糖蛋白(P glycoprotein,P-gp)表达的影响.方法 制备脂质微泡；设计4对siABCB1a序列,并构建4种真核表达质粒pSES-siABCB1a；转染L2RYC细胞(单纯质粒组、质粒+微泡组、质粒+超声组、质粒+微泡+超声组),另设空白对照组.采用流式细胞术检测质粒的转染效率；实时荧光定量PCR及Western blot检测转染后L2RYC细胞中ABCB1a基因及P-gp的表达.结果 4种pSES-siABCB1a质粒经PCR、双酶切及测序证实构建正确；质粒+微泡+超声组pSES-siABCB1a质粒可高效转染L2RYC细胞,可见荧光表达,转染效率为(49.35±5.89)％；转染后ABCB1a基因mRNA及P-gp的表达均明显降低(P＜0.05).结论 超声微泡可促进外源基因体外转染L2RYC细胞,siABCB1a能有效抑制ABCB1a基因和P-gp的表达.

关键词：超声微泡、RNA干扰、转染、ATP结合盒转运蛋白1a、P-糖蛋白

所属期刊栏目：25

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2012-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：285-289