人颗粒酶A全长基因的克隆及原核表达
目的 克隆人颗粒酶A (Granzyme A,GzmA)基因,在大肠杆菌中进行表达,并初步优化表达条件.方法 通过RT-PCR扩增人GzmA基因,插入原核表达载体pET24a(+)中,构建重组表达质粒pET24a-GzmA,转化大肠杆菌BL21( DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并对诱导温度、IPTG浓度、诱导时间和开始诱导时菌液A600值 进行优化.结果 重组表达质粒pET24a-GzmA经双酶切和测序,证实GzmA基因已正确插入载体中,且序列正确；表达的重组蛋白相对分子质量约29 000,且可与小鼠抗His单抗特异性结合；工程菌的最佳诱导温度为37℃,IPTG浓度、诱导时间和开始诱导时菌液A600值对重组蛋白的表达量影响较小.结论 成功克隆了人GzmA基因,并在大肠杆菌中进行了表达.
颗粒酶A、克隆、分子、原核细胞、基因表达
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Q556;Q786(酶)
国家自然科学基金81072459;上海市青年科技启明星计划06QA14017
2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
168-170,175
