稳定表达RAS鸟苷酸释放因子2肺癌细胞株的建立

摘要：

目的 构建带有GFP标签的RAS鸟苷酸释放因子2(RAS guanine nucleotide releasing factor 2,RASGRF2)真核表达质粒,并建立稳定表达RASGRF2的肺癌细胞株.方法 用Sgf Ⅰ和Not Ⅰ双酶切RASGRF2-pCMV6-Myc-DDK质粒,回收RASGRF2基因片段,亚克隆入pCMV6-GFP载体中,构建重组表达质粒RASGRF2-pCMV6-GFP,转染肿瘤细胞H1299,倒置荧光显微镜下观察RASGRF2蛋白的定位.经G418筛选并建立稳定表达RASGRF2的细胞株,RT-PCR及Western blot法检测RASGRF2的表达.结果 经双酶切及测序证实RASGRF2基因成功克隆至真核表达载体pCMV6-GFP中；重组RASGRF2-GFP蛋白在H1299细胞中主要在胞质中表达；经RT-PCR及Western blot证实,RASGRF2在H1299细胞中稳定表达.结论 成功建立了稳定表达RASGRF2基因的肺癌细胞株,为进一步研究RASGRF2基因的功能奠定了基础.

关键词：RAS鸟苷酸释放因子2、真核细胞、基因表达、肺肿瘤

所属期刊栏目：25

分类号：R734.2(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30871137

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：164-167