乙型肝炎病毒x蛋白基因荧光真核表达质粒的构建及其对人正常肝细胞株LO2增殖的影响

摘要：

目的　构建乙型肝炎病毒x蛋白基因荧光真核表达质粒,并检测HBx对人正常肝细胞株LO2细胞增殖的影响.方法 以pcDNA3-HBV质粒为模板,PCR法扩增HBx基因编码区全长序列,将其克隆至pIRES2-EGFP荧光真核表达载体中,构建重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-HBx,转染LO2细胞,筛选稳定表达HBx的细胞,RT-PCR法检测细胞中HBx基因mRNA的转录水平；Western blot法检测细胞中HBx蛋白的表达水平；MTT法检测细胞的增殖活力.结果 重组荧光真核表达质粒pIRES2-EGFP-HBx经双酶切和测序证明构建正确,转染该质粒的LO2细胞可检测到HBx基因mRNA的转录及蛋白的表达,与空质粒pIRES2-EGFP转染的LO2细胞相比,增殖活力明显提高.结论 成功构建了HBx基因荧光真核表达质粒,并获得了能稳定表达HBx蛋白的LO2细胞株,为进一步研究HBx对细胞周期调控通路的影响及探索HBx导致的与HBV相关的HCC的分子机制奠定了基础.

关键词：肝炎病毒、乙型、x蛋白、绿色荧光蛋白质类、真核细胞、基因表达、LO2细胞、细胞增殖

所属期刊栏目：25

分类号：R373.2+1;Q7(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30872248;重庆市科技委员会资助项目CSTC;2008BB5400;重庆医科大学重点科研课题XBZD201001

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：157-160