hsa-miR-150慢病毒表达质粒的构建及鉴定

摘要：

目的 构建hsa-miR-150慢病毒表达质粒,并鉴定其感染肝癌细胞系Hep3B后miR-150的表达水平.方法 根据hsa-miR-150序列化学合成hsa-miR-150基因片段,克隆至慢病毒载体pGIPZ上,构建重组慢病毒表达质粒pGIPZ-hsa-miR-150,转染包装细胞293T进行包装,检测病毒滴度.收获并浓缩重组慢病毒颗粒,稳定转染Hep3B细胞,流式细胞术检测GFP的 表达率；荧光定量PCR检测miR-150的表达水平.结果 重组慢病毒表达质粒pGIPZ-hsa-miR- 150经菌落PCR及测序证实构建正确；重组慢病毒的滴度约为5.7×108 TU/ml；稳定转染Hep3B细胞后,GFP的表达率为(97.78±1.14)％,重组慢病毒转染组miR-150的表达水平较空白对照组增加约6倍(P＜0.05).结论 成功构建了hsa-miR-150慢病毒表达质粒,其在Hep3B细胞中可高效表达,为进一步研究miR-150的生物学功能奠定了基础.

关键词：微RNAs、hsa-miR-150、慢病毒载体、肝肿瘤

所属期刊栏目：25

分类号：R318;Q782(医用一般科学)

资助基金：国家自然科学基金30970843

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：140-143