Lipofectamine(R)LTX转染Jurkat细胞条件的优化

摘要：

目的 优化阳离子脂质体Lipofectamine(R) LTX转染悬浮细胞Jurkat的条件.方法 将带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的两种质粒pIRES2-EGFP和pIRES2-EGFP-STAT6作为基因载体,采用Lipofectamine(R) LTX转染Jurkat细胞,绘制细胞生长曲线,检测培养基新鲜度对细胞生长的影响及细胞培养时间、脂质体与质粒DNA的比例、细胞接种密度、不同量培养基等对转染效果的影响,比较瞬时转染效果.结果 Jurkat细胞生长速度与细胞密度密切相关,转染前1d换液,可保证细胞的良好生长状态,培养基新鲜度对细胞生长影响不大.脂质体体积与质粒质量之比为2.75μl:500 ng时,其转染效果明显优于其他各组.适当加大转染时Jurkat细胞的铺板密度,可以明显提高转染试剂的利用率.转染48 h后,300μl培养基/孔组的绿色荧光阳性率为600 μl培养基/孔组的(1.4±0.2)倍,差异有统计学意义(P＜0.05).转染后24h,Lipofectamine(R) LTX体积与质粒质量各比例组转染效果差异无统计学意义(P＞0.05)；转染48 h后,各比例组转染效果差异有统计学意义(P＜0.05),且质粒pIRES2-EGFP的转染效果明显优于pIRES2-EGFP-STAT6(P＜0.05).结论 优化了Lipofectamine@ LTX转染悬浮细胞Jurkat的条件,为悬浮细胞的转染提供了参考.

关键词：阳离子脂质体、悬浮细胞、Jurkat细胞、转染

所属期刊栏目：24

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30672268

在线出版日期：2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1507-1510,1517