草鱼呼肠孤病毒HZ08株VP4蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

摘要：

目的 原核表达、纯化草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)HZ08株VP4蛋白,并制备其多克隆抗体.方法 采用PCR法扩增GCRV HZ08株S6基因部分节段,插入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-32a-S6,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达.表达的重组蛋白纯化后免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体,采用间接ELISA法测定其效价,Western blot鉴定其特异性.结果 重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确；表达的目的蛋白相对分子质量约为51 000,表达量占菌体总蛋白的73％,主要以包涵体形式表达,反应原性良好；制备的多克隆抗体效价约为1:8000,且具有较高的特异性.结论 成功制备了GCRV HZ08株VP4蛋白高效价多克隆抗体,为VP4蛋白功能的深入研究、抗原表位分析、草鱼出血病诊断方法的建立及相关基因工程疫苗的研发奠定了基础.

关键词：呼肠孤病毒、草鱼、VP4蛋白、多克隆抗体

所属期刊栏目：24

分类号：S941.41+1;R392-33(水产保护学)

资助基金：农业部淡水生物多样性保护与利用重点开放实验室开放课题资助LFBCU0714

在线出版日期：2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1482-1485