重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原制备工艺的建立

摘要：

目的 建立稳定、高效的重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原工程菌的发酵与纯化工艺.方法 研究LcrV工程菌pET-V/BL21 (DE3)在试管和三角摇瓶中的生长和表达规律,对种子培养基、IPTG诱导时机、诱导时间及诱导浓度进行优化,并放大至30 L发酵罐培养,建立稳定的发酵工艺.收获菌体,经冻融、离心收集蛋白溶液,高压匀浆处理后,分别采用Q.Sepharose HP阴离子交换层析、Phenyl Sepharose 6 FF(hs)疏水层析及Superdex 75 pg凝胶过滤层析三步柱层析纯化,建立稳定的纯化工艺,连续纯化3批,并按《中国药典》三部(2010版)的相关要求进行全面检定.结果 经优化的条件培养及诱导表达,工程菌的收菌密度(A600值)可达34,LcrV抗原的表达量达36％,含量为1.6 g/L.发酵产物经柱层析纯化,LcrV产量高于140 mg,纯度大于95％,蛋白总回收率达8.5％以上.各项检定指标均符合《中国药典》三部(2010版)的相关要求.结论 已建立了稳定的、适合规模化生产的LcrV制备工艺,为新型鼠疫组分疫苗的研制奠定了基础.

关键词：耶尔森菌、鼠疫、LcrV抗原、大肠杆菌、发酵、纯化

所属期刊栏目：24

分类号：R378.6+1;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家"863"课题2006AA02Z461

在线出版日期：2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1454-1459