靶向Y-box结合蛋白-1基因的shRNA质粒的构建及鉴定

摘要：

目的 构建靶向Y-box结合蛋白-1(Y-box binding protein-1,YB-1)基因的短发夹RNA(shRNA)表达质粒并鉴定其抑制率.方法 设计并合成3对针对YB-1基因的shRNA链,退火形成双链,与酶切的质粒pGenesil-1连接,构建3个重组质粒pGSi1、pGSi2和pGSi3,脂质体法转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过荧光定量PCR和Western blot分别检测细胞中YB-1基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平.结果 重组质粒pGSi1、pGSi2和pGSi3经酶切及测序证明构建正确；转染MDA-MB-231细胞后,YB-1基因在mRNA和蛋白水平的表达均降低,其中pGSi2的抑制效果最好,在mRNA和蛋白水平的抑制率分别为57.4％和90％.结论 成功构建了靶向YB-1基因的shRNA表达质粒,并筛选出1种对YB-1基因有显著抑制作用的shRNA,为进一步研究YB-1对乳腺癌细胞侵袭、迁移和多药耐药性的影响奠定了基础.

关键词：YB-1基因、RNA干扰、乳腺肿瘤

所属期刊栏目：24

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30872417

在线出版日期：2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1413-1416