随机组合多表位恶性疟疾疫苗M.RCAg-1蛋白的纯化及鉴定
目的 纯化随机组合多表位恶性疟疾疫苗M.RCAg-1蛋白,并进行各项鉴定.方法 对BL21 (DE3)-M.RCAg-1/pDS-ex工程菌发酵产物进行纯化,对纯化的M.RCAg-1蛋白进行各种理化性质鉴定；采用Western blot法检测其反应原性；以不同剂量的M.RCAg-1蛋白免疫BALB/c小鼠及新西兰大白兔,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗体效价；间接荧光免疫法(IFA)分析免疫血清对天然疟原虫抗原的识别；酶联免疫斑点试验检测特异性鼠T淋巴细胞的活化及细胞因子的分泌；体外生长抑制试验检测免疫兔血清对恶性疟原虫生长的影响.结果 M.RCAg-1蛋白表达量约为菌体总蛋白的30％,浓度为1.5 mg/ml,纯度可达95％左右,等电点为5.0；内毒素残留量均小于2.5 EU/mg,宿主蛋白残留量为0.08％,N-末端氨基酸序列正确；可与相应鼠单抗特异性结合；免疫小鼠血清抗体水平随着免疫次数和免疫剂量的增加而升高,20及30 μg剂量组在末次免疫后,血清抗体滴度均可达1:1 031 707;各免疫组小鼠血清均能识别恶性疟原虫天然抗原,且呈抗原剂量依赖性；10、20和30 μg剂量组能刺激相应特异性脾淋巴细胞显著增殖(P＜0.01)及分泌IFNγ和IL-4(P＜0.01),并能较好地抑制疟原虫体外生长.结论 纯化的M.RCAg-1蛋白理化性质稳定,具有较强的免疫原性,能激发可持续、高滴度的特异性抗体,并能诱发显著的T细胞应答,是极具潜力的候选疫苗蛋白,具有较好的开发前景.
M.RCAg-1蛋白、多表位蛋白、疟疾疫苗
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R382.3+1;R392-3(医学寄生虫学)
863计划"疫苗与抗体工程"重大专项2006AA02A224;"艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治"科技重大专项2008ZX10004-015
2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1391-1395,1399
