肺炎球菌表面蛋白A的原核表达及其作为多糖结合疫苗载体的可行性
目的 原核表达肺炎球菌表面蛋白A(Pneumococcal surface protein A,PspA),并探讨其作为多糖结合疫苗候选载体的可行性.方法 合成PspA基因,定向克隆至pET-30a(+)载体,构建重组表达质粒pET-30a-rPspA,转化E.coli Star( DE3)菌株,IPTG诱导表达.表达产物经Ni离子亲和层析纯化后,经Western blot鉴定.取破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)及纯化的rPspA,分别与A群脑膜炎球菌多糖(Group A meningococcal capsular polysaccharide,GAMP)通过溴化氰活化法进行偶联,获得rPspA-GAMP与TT-GAMP多糖蛋白结合物,对其进行纯化及检定.多糖结合物分别以滴鼻和肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,评价其诱发的体液免疫和黏膜免疫水平.结果 重组表达质粒经双酶切及测序鉴定构建正确；表达产物主要以可溶形式存在,表达量约占菌体总蛋白的20％,经纯化后纯度可达90％,可与His单抗特异性结合；肌肉注射途径显示,两种蛋白载体的结合物均能诱发较高水平的体液免疫,不同载体间差异无统计学意义(P＞0.05)；滴鼻途径显示,载体蛋白rPspA的结合物刺激产生sIgA的能力优于传统载体TT,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 原核表达并纯化了rPspA,其具有新型多糖蛋白载体的潜力,也可作为黏膜投递型多糖结合疫苗的候选载体.
肺炎球菌表面蛋白A、多糖结合疫苗、载体
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R378.1+4;R392-3(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家十一五科技支撑计划资助项目2008BA166B03
2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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