重组戊型肝炎病毒抗原ELISA检测方法的建立

摘要：

目的 建立重组戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于HE疫苗中HEV抗原含量的检测.方法 以重组HEV病毒样颗粒作为免疫原,免疫母鸡,制备抗HEV-IgY多克隆抗体,纯化后作为包被抗体,HRP标记的抗HEV单克隆抗体作为检测抗体,建立HEV抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对其进行验证.用建立的方法检测3批HE疫苗成品的HEV抗原含量,计算HEV抗原对氢氧化铝的吸附率.结果 建立的ELISA方法线性范围为2～128 ng/ml,最低定量限为2 ng/ml;该方法检测冻干甲肝减毒活疫苗、重组人白介素-2( IL-2)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、人血白蛋白、小牛血清及健康人血清均无交叉反应；该方法检测3个浓度的HEV抗原内部参考品的回收率在95. 13％～104.50％之间,试验内及试验间变异系数均＜15％；包被抗HEV-IgY的酶标板于37℃放置5d,其检测HEV抗原内部参考品的A 450值及敏感性均未发生显著变化；3批HE疫苗成品中HEV抗原对氢氧化铝的吸附率均大于95％,符合相关质控要求.结论 已成功建立了HEV抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,可用于HEV抗原含量的检测.

关键词：肝炎病毒、戊型、抗原、病毒样颗粒、IgY、酶联免疫吸附测定

所属期刊栏目：24

分类号：R373.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2012-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1363-1365,1372