牛心肌肌钙蛋白T的提取、纯化及其单克隆抗体的制备
目的 提取、纯化牛心肌肌钙蛋白T( Cardiac troponin T,cTnT),并制备其单克隆抗体.方法 采用组织匀浆、蛋白层析技术提取、纯化牛cTnT,紫外分光光度法检测其浓度;SDS-PAGE检测其纯度;间接ELISA法检测其反应特性.将纯化的牛cTnT免疫小鼠,进行细胞融合,间接ELSIA法筛选阳性杂交瘤细胞株,采用小鼠体内法制备腹水.结果 纯化的两批牛cTnT浓度分别为0.246和0.336 mg/ml;相对分子质量约为37 000,纯度分别为86.02%和93.77%;纯化的cTnT蛋白可与鼠抗牛cT-nT单克隆抗体结合.共获得5株分泌抗牛cTnT单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中,阳性杂交瘤细胞株3B10腹水抗体效价达1∶10240.结论 已成功提取、纯化了牛cTnT,并建立了稳定分泌抗牛cTnT单抗的杂交瘤细胞株,为cTnT检测试剂盒的国产化奠定了基础.
心肌肌钙蛋白、牛、抗体、单克隆
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R392-33
2012-01-18(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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