分枝杆菌噬茵体D29裂解酶gp10的原核表达及抗脓肿分枝杆菌活性

摘要：

目的 克隆并原核表达分枝杆菌噬菌体D29裂解酶gp10基因,观察重组蛋白对脓肿分枝杆菌的抑菌作用.方法 以噬菌体D29基因组DNA为模板,PCR扩增gp10基因片段,克隆至pET-32a(+)载体上,构建重组原核表达质粒pET-32a-gp10,转化E.Coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,亲和层析纯化后,采用杯碟法检测其抑菌活性.结果 PCR扩增获得长1 454 bp的gp10基因片段,重组表达质粒pET-32a-gp10经PCR、双酶切及测序证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为54 800,表达量占菌体总蛋白的97.4％,破菌上清及破菌沉淀中均可见目的蛋白的表达,纯化后纯度可达90％,浓度为0.5mg/ml;重组蛋白对脓肿分枝杆菌有抑菌作用.结论 已成功表达重组分枝杆菌噬菌体D29裂解酶gp10,其对脓肿分枝杆菌具有抑菌作用,为抗脓肿分枝杆菌及其他非结核分枝杆菌感染新药物的研制提供了依据.

关键词：分枝杆菌、非典型性、细菌噬菌体、裂解酶、基因表达、抗菌活性

所属期刊栏目：24

分类号：Q786;R392-33(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2012-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1269-1272