恶性疟原虫合子表面蛋白Pfs25毕赤酵母双启动子表达系统的构建及表达

摘要：

目的 构建恶性疟原虫合子表面蛋白Pfs25毕赤酵母双启动子表达系统并进行表达.方法 应用基因重组技术构建含pfs25基因的醇氧化酶启动子1(Alcohol oxidase promoter 1,AOX1)重组质粒pICpfs25和三磷酸甘油醛脱氢酶启动子(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAP)重组质粒pGAPpfs25,取酶切鉴定和测序正确的重组质粒电转化毕赤酵母菌GS115,获得毕赤酵母重组体ICpfs25和GAPpfs25,并构建含两种启动子的酵母重组体IC-GAP/2pfs25,甲醇诱导pfs25基因表达,Western blot分析表达产物的反应原性,ELISA分析各重组体表达上清中Pfs25蛋白的含量.结果 各重组体的表达产物经SDS-PAGE分析均可见相对分子质量约25 000的Pfs25蛋白条带,双启动子重组体Pfs25蛋白的表达量约占表达上清的70％,明显高于单一启动子重组体,且双启动子重组体Pfs25蛋白的表达量随着补加甲醇量的增加而逐渐增加；各重组体的表达产物均可与小鼠抗Pfs25单抗487特异性结合；双启动子重组体表达上清的ELISA反应明显强于其他重组体表达上清.结论 已构建了恶性疟原虫合子表面蛋白Pfs25毕赤酵母双启动子表达系统,两种启动子共同作用可明显提高目的蛋白的表达量.

关键词：恶性疟原虫合子表面蛋白、毕赤酵母、双启动子、基因表达

所属期刊栏目：24

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2012-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1249-1253