曼氏血吸虫虫卵白细胞介素-4诱导因子的原核表达及多克隆抗体的制备
目的 原核表达曼氏血吸虫虫卵白细胞介素-4诱导因子(IL-4-inducing principle of schistosoma eggs,IPSE),并制备小鼠多克隆抗体.方法 人工合成IPSE基因,采用PCR技术克隆其成熟体开放阅读框,插入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-IPSE.转化E coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析后,应用组氨酸标签蛋白纯化柱纯化包涵体蛋白,免疫BALB/c鼠,制备多克隆抗体.结果 克隆的IPSE基因与GenBank中登录的基因序列同源性为100％;重组表达质粒pET-28a-IPSE经PCR及双酶切鉴定证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为16 000,以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30％,可与鼠抗His单抗特异性结合；用纯化的包涵体蛋白免疫BALB/c小鼠后,获得的特异性抗血清效价为2× 10-4,该血清可与IPSE蛋白发生特异性反应.结论 已原核表达、纯化了曼氏血吸虫IPSE蛋白,并制备了高滴度的特异鼠抗血清,为进一步从日本血吸虫中筛选相似蛋白及研究其功能奠定了基础.
血吸虫、曼氏、虫卵白细胞介素-4诱导因子、原核细胞、基因表达、包涵体、多克隆抗体
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R378.2+4;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家传染病防治重大专项2008ZX 10004-001-B;吉林大学研究生创新基金20091033
2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1140-1143
