乙型肝炎病毒核心抗原的原核表达及纯化

摘要：

目的 原核表达乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg),纯化HBcAg病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP),并对其理化性质进行鉴定.方法 根据大肠杆菌密码子偏爱性对HBcAg基因进行密码子优化,全基因合成优化基因,克隆至载体pET-32a(+)中,构建原核表达质粒pET-HBcAg,转化大肠杆菌BL21( DE3),IPTG诱导表达.重组蛋白经盐析和层析纯化后,经SDS-PAGE、Western blot、电镜观察、等电点分析、高效液相色谱(HPLC)分析和N-末端氨基酸测序等进行鉴定.结果 重组表达质粒经酶切和测序鉴定证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为21 000,为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的21.6％；纯化后其纯度可达99.4％,具有良好的反应原性,VLP形成良好,结构均一,等电点在pH6.0～6.9之间,HPLC分析形成T3和T4两种不同结构,N-未端序列正确,无氨基酸降解.结论 已成功构建了HBcAg原核表达质粒,并获得了高纯度的HBcAgVLP,为进一步研究HBcAg VLP的生物学特性奠定了基础.

关键词：肝炎核心抗原、乙型、病毒样颗粒、基因优化、原核细胞、基因表达、纯化

所属期刊栏目：24

分类号：R373.2;Q786(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项2008ZX10002-002

在线出版日期：2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1121-1125