牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白的原核表达及纯化
目的 原核表达并纯化牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白.方法 以牛型结核分枝杆菌Vallee株全基因组DNA为模板,PCR扩增MPT64基因,克隆至pET-28a(+)载体,构建重组原核表达质粒pET-MPT64,转化至E.coli BL21 (DE3)中,IPTG 诱导表达.表达产物经SDS-PAGE鉴定后,用Ni-NTA亲和层析纯化,Western blot鉴定纯化蛋白.结果 获得的MPT64基因测序结果与GenBank中登录的MPT64基因核苷酸序列同源性为100%;重组表达质粒pET-MPT64经酶切鉴定表明构建正确；表达的重组MPT64蛋白相对分子质量约为26 000,主要以可溶性形式表达,表达量约占全菌总蛋白的11%；纯化的重组MPT64蛋白纯度达93%,可与抗结核牛血清发生特异性反应.结论 成功原核表达并纯化了牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白,其可作为诊断抗原用于新型牛结核病的检测.
牛型结核分枝杆菌、MPT64蛋白、原核细胞、基因表达、纯化
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R378.91+1;Q786(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家科技支撑项目2008BAD96B11;国家级实验教学示范中心吉林大学动物科技实验教学中心大学生开放性创新实验项目200981SA05;吉林省科技发展计划项目201101076
2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1054-1056,1060
