恒河猴白细胞介素-4基因的合成、原核表达及纯化

摘要：

目的 人工合成恒河猴白细胞介素-4( Macaca mulatta Interleukin-4,Mamu IL-4)基因,并在大肠杆菌中高效表达及纯化.方法 根据大肠杆菌遗传密码偏爱性优化设计并人工合成Mamu IL-4(mIL-4)基因,克隆入pET43.1a(+)表达载体,构建重组表达质粒pET43.1 a-mIL-4,转化大肠杆菌BL21-CodonPIus(DE3)-RIPL,经IPTG诱导表达.通过阳离子交换层析及稀释复性等步骤对表达的重组mIL-4蛋白进行纯化,纯化产物经Western blot进行鉴定.结果 双酶切及测序证实重组表达质粒pET43.1a-mIL-4构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为15 000,表达量约占菌体总蛋白的40%,主要以包涵体形式存在,经纯化复性后纯度可达95%以上；Western blot检测其能与鼠抗mIL-4单克隆抗体特异性结合.结论 在大肠杆菌中高效表达了重组mIL-4蛋白,纯化的蛋白纯度较高,为其生物学活性及佐剂的相关研究奠定了基础.

关键词：恒河猴、白细胞介素-4、基因合成、原核细胞、基因表达、纯化

所属期刊栏目：24

分类号：Q511;Q78(蛋白质)

资助基金：“重大新药创制”科技重大专项“十一五”计划2009ZX09103-741

在线出版日期：2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1046-1049,1053