小鼠神经细胞cDNA T7噬菌体表面展示文库的构建

摘要：

目的 构建小鼠神经细胞cDNA T7噬菌体表面展示文库.方法 用Trizol试剂提取原代小鼠神经细胞总RNA,分离、纯化mRNA,经反转录合成其双链cDNA.在双链cDNA末端加上定向EcoR Ⅰ/HindⅢ接头,用内切酶EcoR Ⅰ和HindⅢ消化接头,以形成两端分别带有EcoR Ⅰ和HindⅢ黏性末端的双链cDNA.经Mini Column进行纯化,收集大小在300 bp以上的双链cDNA片段,将其连接于含有EcoR Ⅰ和HindⅢ末端的T7Select 10-3b载体上,体外包装后经BLT5403菌株增殖,进行文库扩增.结果 所构建的文库库容量为含有3.04× 107个重组子,原始滴度为2.8×107 pfu/ml,重组率为92%,扩增后文库滴度为3.5×1010 pfu/ml.对随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,88%的插入片段大于300 bp.结论 成功构建了小鼠神经细胞cDNA T7噬菌体表面展示文库.

关键词：小鼠、神经元、细菌噬菌体T7、基因文库

所属期刊栏目：24

分类号：Q2-33;Q78

资助基金：国家自然科学基金31072134;30871849;吉林省自然科学基金201115040

在线出版日期：2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1013-1015,1021