甲型流感病毒血凝素基因在昆虫杆状病毒系统中的表达

摘要：

目的 利用昆虫杆状病毒系统表达甲型流感病毒血凝素( Hemagglutinin,HA)蛋白.方法 PCR扩增去除信号肽的甲型H1N1(A/PR/8/34)流感病毒HA基因,与pFastBacdual载体(pFBd)连接,构建转移载体pFBd-HA,转化含Bacmid的DH 10Bac感受态细胞,获得穿梭质粒rBacmid-HA.rBacmid-HA转染sf9昆虫细胞,获得重组病毒rBac-HA.采用噬斑形成法检测病毒滴度,PCR法检测重组杆状病毒基因组HA基因,间接免疫荧光法、Western blot法和ELISA法检测HA蛋白的表达.结果穿梭质粒rBacmid-HA经PCR鉴定构建正确；第3代rBac-HA的滴度为3×107pfu/ml;感染rBac-HA的sf9细胞经PCR扩增可见4 216 bp的特异性条带,间接免疫荧光检测可见绿色荧光,Western blot鉴定与鼠抗甲型流感病毒HA( H1)单抗和鸡抗流感病毒(California株)多抗发生特异性反应,ELISA检测与鼠抗流感病毒(PR8株)多抗特异性结合的能力强于与鸡抗流感病毒(California株)多抗结合的能力.结论 利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达了甲型流感病毒HA蛋白.

关键词：血凝素糖蛋白类、流感病毒、杆状病毒、sf9细胞

所属期刊栏目：24

分类号：R373.1+3;Q78(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项2009ZX10004-710

在线出版日期：2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1007-1012