表达鼠干扰素7的重组卡介苗的构建及鉴定

摘要：

目的 构建分泌表达鼠IFNγ(Mouse interferon-gamma,mIFN-γ)的重组卡介苗(Bacillus Calmette-Gu6rin,BCG),并进行鉴定.方法 PCR扩增BCG抗原85B的信号肤序列,插入E.coli-BCG穿梭载体pBCG3000的启动子下游,构建分泌性重组穿梭质粒S-pBCG3000;以PHA刺激小鼠脾细胞产生的RNA为模板,RT-PCR扩增mIFNγ成熟肽的编码cDNA,插入S-pBCG3000质粒的信号肽序列下游,构建mIFNγ的表达质粒S-pBCG3000-γ;通过电穿孔技术将表达质粒转入BCG,以卡那霉素和PCR筛选重组BCG,ELISA法检测重组BCG培养滤液中的mIFNγ含量,细胞病变抑制法鉴定mIFNγ的生物活性.结果 经测序、PCR扩增和酶切鉴定分析,Ag85B信号肽和mIFNγ成熟肽的编码序列均成功克隆并插入到pBCG3000的相应位点,表达质粒转化BCG后获得的重组BCG分泌 mIFNγ的含量高达1234.1pg/ml,在L929细胞中的抗VSV活性为64 U/ml.结论 所构建的重组BCG可分泌具有功能活性的mIFNγ,为进一步研究其免疫效应奠定了基础.

关键词：干扰素γ、重组、卡介苗、基因重组

所属期刊栏目：24

分类号：Q511;Q782(蛋白质)

在线出版日期：2011-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：923-926