稳定表达重组长效促红细胞生成素的CHO-K1细胞株的筛选

摘要：

目的 将密码子优化的一系列长效促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)基因定点整合至CHO-K 1细胞株中,获得高效稳定表达的细胞株.方法 对EPO基因定点突变得到Darbepoetin-1序列(专利公开序列)及其同义密码子序列.arbe-poetin-2,Darbepoetin-3,并构建相应重组表达质粒pcDNA5 /FRT/dbp(s),采用定点整合技术,转染CHO-K1细胞株,经ELISA和荧光定量PCR法鉴定转染细胞株,比较同一整合位点同义密码子Darbepoetin alfa蛋白表达水平的差异.蛋白样品经蓝胶亲和层析、凝胶过滤和离子交换层析后,进行SDS-PAGE,Westem blot及等电聚焦电泳分析.结果 重组表达质粒pcDNA5 /FRT / dbp(s)经测序鉴定正确;ELISA检测表明,Darbepoetin-2的表达水平明显优于Darbepoetin- I和Darbepoetin-3,最高可达1 845 IU / ml; SDS-PAGE分析显示,纯化的Darbepoetin alfa比rHuEPO具有更高的相对分子质量,可与兔抗人EPO多抗特异性结合,且比rHuEPO具有更高的唾液酸丰度.结论 获得了高效稳定表达重组Darbepoetin alfa的CHO-K1细胞株.

关键词：促红细胞生成素、密码子、CHO细胞

所属期刊栏目：24

分类号：Q78;R392-33(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2011-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：898-902