含阿德福韦酯耐药突变位点的HBV聚合酶逆转录酶区域的原核表达
目的 原核表达含阿德福韦酯(Adefovir,ADV)耐药突变位点的HBV聚合酶逆转录酶(Reverse transcriptase,RT)区域.方法 以野生型HBV DNA为模板,PCR扩增HBV聚合酶RT区域,克隆至质粒pHis-SUMO上,构建重组表达质粒SUMO-RTWT,并通过定点突变构建含ADV耐药突变位点(181T/ V十236T)的突变质粒SUMO-MT1和SUMO-MT2,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析,并进行表达条件的优化及HBV聚合酶RT区域的结构建模.结果 重组表达质粒SUMO-RTWT、SUMO-MT1和SUMO-Mn经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为56000,可与鼠抗His单克隆抗体发生特异性结合;经表达条件优化后,3种重组质粒在大肠杆菌Roset-ta(DE3)中均获得有效稳定的表达;同源结构建模结果表明,HBV聚合酶RT区域具有典型的DNA聚合酶的结构.结论 已成功构建了含ADV耐药突变位点HBV聚合酶RT区域的重组原核表达质粒,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中获得稳定表达的可溶性目的 蛋白,为研究ADV的耐药机制奠定了基础.
HBV聚合酶、逆转录酶区域、阿德福韦酯、融合蛋白、原核细胞、基因表达
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R373.2+1;Q786(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家高技术研究发展计划'863计划'资助项目2008AA02Z424;重庆市教委资助项目KJ100309;重庆医科大学资助课题XBYB2008060
2011-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
893-897
