电穿孔法转染增强型绿色荧光蛋白基因对人骨髓间充质干细胞生物学特性的影响
目的 探讨电穿孔法转染增强型绿色荧光蛋白(Enhanccd green fluorescent protein,EGFP)基因对人骨髓间充质干细胞(Human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)生物学特性的影响.方法 采用密度梯度离心法分离健康人BMSC,将pEGFP-N1质粒电穿孔转染hBMSCs,倒置显微镜下观察转染前后细胞的形态学变化,荧光显微镜观察转染后细胞EGFP的表达,流式细胞仪检测转染效率;取第5代未转染及转染后24h的hBMSCs,常规培养,绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测转染前后细胞亚型;对转染前后的hBMSCs进行成脂和成骨诱导分化培养,油红O和茜素红染色观察诱导分化结果.结果 分离培养的hBMSCs形态均一,转染前后细胞形态无明显差异;转染24 h后荧光镜下观察到有绿色荧光出现,转染效率为(48.65±11.23)%,转染前后的细胞生长曲线无显著差异;流式细胞仪检测CD44及CDl05阳性率均在99%以上,不表达CD45,符合BMSCs特征,转染后hBMSCs表型未见明显变化;转染前后分别定向诱导均可形成成脂细胞及成骨细胞.结论 电穿孔法可使EGFP获得较高的转染效率,转染后的hBMSCs生物学特性未发生改变.
电穿孔、骨髓间充质干细胞、绿色荧光蛋白质类、转染
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Q784;Q25(基因工程（遗传工程）)
2011-10-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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