肺炎支原体黏附蛋白P1羧基末端的原核表达及纯化

摘要：

目的 原核表达并纯化肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)黏附蛋白P1羧基末端.方法 提取MP FH型基因组DNA,以其为模板,PCR扩增P1羧基末端基因,插入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒,转化E.coli Rosetta,IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经镍离子亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE、Western blot和ELISA鉴定.结果 重组表达质粒pET-32a-MP-PIC经PCR、双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约55 900,以可溶性形式表达,表达量占菌体总蛋白的47%;纯化的重组蛋白纯度达94%以上,浓度为3.77 mg/ml,可与支原体肺炎患者血清特异性反应,经3 000倍稀释后,仍可与支原体肺炎患者血清发生阳性反应.结论 原核表达并纯化了MP黏附蛋白P1羧基末端,为进一步研究MP的致病机制及研发诊断试剂和基因疫苗奠定了基础.

关键词：肺炎支原体、黏附蛋白、原核细胞、基因表达

所属期刊栏目：24

分类号：R375+.2;Q786(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2011-09-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：672-675