TIMP1基因重组真核表达质粒的构建及其在MCF-7细胞中的表达
目的 构建3种TIMP1基因重组真核表达质粒,并在人乳腺癌MCF-7细胞中表达.方法 将TIMP1基因分别插入3种真核表达载体pcDNA3.1(+)、pVAX Ⅰ和pEGFP-C1,构建3种重组表达质粒pcDNA3.1(+)-TIMP1、pVAX Ⅰ-TIMP1和pEGFP-C1-TIMP1,转染MCF-7细胞,采用Real-time PCR和Western blot法检测TIMP1基因在MCF-7细胞中的表达.结果 3种重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;重组表达质粒pEGFP-C1-TIMP1转染MCF-7细胞48 h后,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光,而pcDNA3.1(+)-TIMP1和pVAX Ⅰ-TIMP1转染的细胞则观察不到绿色荧光;在转染的MCF-7细胞中,TIMP1基因mRNA转录水平和蛋白表达水平从高到低依次为pcDNA3.1(+)-TIMP1、pVAX Ⅰ-TIMP1和pEGFP-C1-TIMP1.结论 已成功构建了3种TIMP1基因重组真核表达质粒,其在MCF-7细胞中的表达量有差异.
基质金属蛋白酶抑制剂1、真核细胞、基因表达、乳腺肿瘤
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Q782;Q786(基因工程（遗传工程）)
国家重大基础研究计划资助项目2006CB910505
2011-09-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
649-652
