病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ在毕赤酵母中的表达及其抗HIV-1活性

摘要：

目的 在毕赤酵母中表达病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ(Viral macrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ),并检测其抗HIV-1活性.方法 通过PCR技术从质粒pQE-vMIP-Ⅱ中扩增vMIP-Ⅱ基因,插入酵母表达载体pPICZaA中,构建表达质粒pPICZaA-vMIP-Ⅱ,转化毕赤酵母菌X33,甲醇诱导表达.表达产物经镍离子亲和层析和分子筛层析纯化后,进行Western blot 鉴定,并检测重组vMIP-Ⅱ蛋白对HIV-1诱导的细胞合胞体形成的抑制作用.结果 重组表达质粒pPICZaA-vMIP-Ⅱ经酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组vMIP-Ⅱ蛋白的相对分子质量约为8 500,以分泌形式表达于重组酵母菌的发酵上清中;纯化的重组蛋白纯度达97.3%,且可与HRP标记的vMIP-Ⅱ多克隆抗体发生反应;重组vMIP-Ⅱ蛋白组的合胞体数目明显少于阳性对照组(P＜0.05),其IC50值为1.35 ng/ml.结论 已成功在毕赤酵母中表达了重组vMIP-Ⅱ蛋白,其具有较强的抑制HIV-1的活性.

关键词：病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ、毕赤酵母、HIV-1

所属期刊栏目：24

分类号：R373.9;Q786(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金308272221;2011年暨南大学青年教师科研培育与创新基金中央高校基本科研业务费专项资金

在线出版日期：2011-09-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：629-633