VEGF-SLC融合基因的克隆与原核表达

摘要：

目的 构建血管内皮生长因子(Vascular endothelial growthfactor,VEGF)-次级淋巴组织趋化因子(Secondary lymphoid-fissue chemokine,SLC)融合基因(VEGF-SLC)的原核表达质粒,表达并纯化重组VEGF-SLC融合蛋白.方法 利用Gene SOEing法扩增VEGF-SLC基因,将融合基因插入载体pQE30,构建重组表达质粒pQE30-VEGF-SLC,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒纯化.结果 重组表达质粒经双酶切和测序证明构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约28 000,诱导5 h表达量最高,约占菌体总蛋白的19%,主要以包涵体形式存在,可与鼠抗人VEGF单抗特异性结合;纯化的重组融合蛋白纯度可达90%以上.结论 已成功在大肠杆菌中表达并纯化了重组VEGF-SLC融合蛋白,为进一步研究其生物学活性及其靶向抗肿瘤效应以及开发肺癌等肿瘤的靶向生物制剂奠定了基础.

关键词：血管内皮生长因子类、趋化因子CCL21、重组融合蛋白质类、原核细胞、基因表达

所属期刊栏目：24

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2011-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：566-570