肠道病毒71型类病毒颗粒在昆虫细胞Sf9中的表达

摘要：

目的 构建含有肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)P1和3CD基因的嵌合型重组杆状病毒质粒,探讨3CD蛋白酶对P1蛋白的切割作用及形成类病毒颗粒(Virus-like particles,VLPs)的可能性.方法 将EV71的P1和3CD基因克隆至同一pFastBac Dual质粒上,转化感受态大肠杆菌DH10,构建重组杆状病毒质粒Bac-P1-3CD,转染昆虫细胞Sf9,制备重组杆状病毒,经SDS-PAGE、Western blot及电镜对目的 基因表达产物进行分析.结果 重组杆状病毒质粒Bac-P1-3CD经PCR鉴定证明构建正确.重组杆状病毒感染的Sf9细胞经SDS-PAGE分析,可见相对分子质量约39 000、32 000和26 000的特异条带,大小与EV71的VP1、VP0、VP3蛋白相符;Western blot分析可见与EV71 VP1蛋白大小相近的特异条带;电镜观察可见EV71类病毒颗粒.结论 EV71的P1和3CD嵌合基因可以通过重组杆状病毒在昆虫细胞中表达,3CD蛋白酶可以切割P1蛋白得到VP1抗原,并能形成类病毒颗粒.

关键词：肠道病毒A型、人、P1基因、3CD基因、杆状病毒科、类病毒、病毒粒子

所属期刊栏目：24

分类号：R373.2;Q786(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2011-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：513-516,521