人博卡病毒结构和非结构蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

摘要：

目的 原核表达、纯化人博卡病毒(Human bocavirus,HBoV)结构蛋白(VP2)和非结构蛋白(NS1和NP1),并制备多克隆抗体.方法 采用PCR法扩增HBoV VP2、NS1和NP1基因,克隆入原核表达载体pET-30a(+)中,转化E.coli BL21 (DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经离子交换和Ni2+金属螯合层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析,并免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,ELISA法检测多抗效价.结果 重组原核表达质粒pET-30a-VP2、pET-30a-NS1和pET-30a-NP1经双酶切和测序证实构建正确;重组VP2蛋白以包涵体形式表达为主,重组NP1蛋白以可溶性表达为主,重组NSl蛋白为包涵体形式表达,表达量分别为菌体总蛋白的20%、40%和30%;纯化的重组蛋白纯度分别可达85%、95%以上和80%o,免疫BALB/c小鼠制备的多克隆抗体效价分别为VP2和NP1高于1:16 000,NS1为1:8 000.结论 已成功表达了HBoV VP2、NS1和NP1蛋白,并制备了高效价的多克隆抗体,为进一步研究HBoV的致病机制及开展流行病学调查等提供了材料.

关键词：博卡病毒属、原核细胞、基因表达、纯化、抗体

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分类号：R373.1;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：本项目由国际科技合作项目资助2010DFB33270

在线出版日期：2011-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：497-501