单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D胞外区片段在哺乳动物细胞中的表达及其免疫活性

摘要：

目的 在哺乳动物细胞中表达单纯疱疹病毒Ⅱ型(Herpes simplex virus type-2,HSV-2)糖蛋白D(Glycoprotein D,gD)胞外区片段,并分析其免疫活性.方法 化学合成HSV-2G株gD蛋白胞外区片断的基因序列gDt,以pCEP4作为表达载体,构建N-末端带His标签的重组表达质粒pCEP4-gDt,转染至HEK293细胞进行表达.表达的蛋白采用镍离子柱亲和层析纯化,ELISA法检测目的 蛋白的抗原性.以纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多抗血清,间接ELISA法检测效价.结果 重组表达质粒经PCR、双酶切和DNA测序证实构建正确;表达产物经Western blot分析,在相对分子质量约46 000处可见目的 蛋白条带;纯化的重组蛋白浓度约为45μg/ml,经ELISA检测证实具有良好的抗原性,免疫小鼠5周后,血清中特异性抗体效价达5×103.结论 已在哺乳动物细胞中表达了HSV-2gD胞外区片段,其具有良好的抗原性和免疫原性,为HSV基因重组亚单位疫苗的研制奠定了基础.

关键词：单纯疱疹病毒、包膜糖蛋白D、哺乳动物细胞、免疫活性

所属期刊栏目：24

分类号：R373.1+1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家"863"计划项目2006AA02A226

在线出版日期：2011-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：384-388