稳定表达甲型流感病毒血凝素蛋白的哺乳动物细胞系的建立
目的 建立稳定表达甲型流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)蛋白的哺乳动物细胞系.方法 PCR扩增流感病毒(A/PR/8/34)全长HA基因,并将其克隆人真核表达载体pcDNA5/FRT(pDF)中,构建重组表达质粒pDF-HA,将其与表达Flp重组酶的pOG44质粒共转染Flp-In-CHO细胞,通过体内同源重组使目的 基因整合至宿主细胞染色体上.采用Hygromycin B持续压力筛选重组细胞系CHO-HA,通过间接免疫荧光法(IFA)和Western blot法检测HA蛋白的表达.重组细胞连续培养10代后,采用PCR和IFA法检测细胞中HA的基因遗传和蛋白表达的稳定性.结果 重组表达质粒pDF-HA经双酶切及测序,证实构建正确;通过Hygromycin B抗性及IFA,共筛选出20株高表达HA蛋白的重组细胞株,Western blot结果进一步证实,HA蛋白在重组细胞中获得表达,并被切割成HA1和HA2蛋白;连续培养10代后,PCR与IFA方法分别检测到重组细胞HA基因和蛋白的表达.结论 已成功建立了稳定表达甲型流感病毒HA蛋白的哺乳动物细胞系,为针对HA蛋白和流感病毒的免疫学检测以及HA蛋白的功能研究提供了靶细胞.
血凝素糖蛋白类、流感病毒、哺乳动物细胞、稳定表达
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R373.1+3;Q78(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
"艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治"科技重大专项2009ZX10004-710
2011-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
379-383
