乙型肝炎病毒核心抗原与前S1抗原融合蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性
目的 原核表达、纯化乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)(1～155)与前S1抗原(PreS1)(3～55)融合蛋白,并分析其免疫原性.方法 从HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者血清中提取HBV DNA,以其为模板,PCR分别扩增HBeAg和preS1部分基因片段及融合基因CS1,将CS1基因亚克隆入原核表达载体pET-32a(+),构建重组原核表达质粒pET-CS1,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经纯化后进行SDS-PAGE,HPLC和Western blot等分析.将纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用竞争抑制法检测血清Anti-1-PreS1水平,间接ELISA法检测Anti-PreS1水平,并检测抗体亚类;ELISPOT法评价其细胞免疫效果.结果 重组原核表达质粒pET-CSI经双酶切证明构建正确;电镜分析表明粗纯的CS1可自行组装成病毒样颗粒(VLP),直径约为30 nm;SDS-PAGE和HPLC分析显示,CS1蛋白纯度分别为98.2%和93%;纯化的CS1蛋白可与兔抗人HBeAg多抗和鼠抗人Presl单抗特异结合,并能诱导小鼠产生Anti-HBc和Anti-PreS1抗体,抗体亚类以IgG2为主,并能够诱生小鼠脾细胞产生HBeAg特异性的IFNγ.结论 已成功原核表达并纯化了融合蛋白CS1,纯化的CS1纯度较高,能诱导机体产生较高水平的特异性体液免疫和细胞免疫反应.
肝炎核心抗原、乙型、前S1抗原、重组融合蛋白质类、体液免疫、细胞免疫
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R373.2+1;Q78(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
2011-06-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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