微量滴定板上的弹性蛋白酶动态显色法检测α1-蛋白酶抑制剂活性

摘要：

目的 建立微量滴定板上的弹性蛋白酶动态显色法(以下简称微量滴定板法),用于α_1-蛋白酶抑制剂(α_1-Pro-teinase inhibitor,α_1-PI)的活性检测.方法 以微量滴定板为载体,将不同量的α_1-PI样品与定量的弹性蛋白酶混合,通过适宜的显色底物对剩余的弹性蛋白酶活性进行测定.用酶标仪测定405nm处A值的变化,分析试验的有效性,并计算α_1-PI样品的活性.优化微量滴定板法的实验条件.用BCS凝集分析仪检测α_1-PI的活性,确认样品的工作浓度.采用两种方法检测19份样品的α_1-PI活性,分析二者的相关性.结果 微量滴定板法的最优实验条件为:样品加样体积50μl,标准曲线范围为(2-14)μg/ml;弹性蛋白酶稀释度为1:1400,体积10μl;孵育时间15min;底物稀释度为1:10,体积50μl;连续监测A_(405)值10min.微量滴定板法和BCS法检测19份样品的相关系数大于0.99.结论 微量滴定板法检测α_1-PI活性的时间更短,同一样品不同稀释度之间检测结果的变异率更低,且检测结果与BCS法相关性良好,可替代全自动的BCS法,降低检测成本.

关键词：α1抗胰蛋白酶、胰弹性蛋自酶、滴定分析法、动态显色法、BCS

所属期刊栏目：24

分类号：B392-33

在线出版日期：2011-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：225-229