镉离子单克隆抗体的制备及其阻断ELISA检测方法的建立
目的 制备重金属镉离子(Cd2+)单克隆抗体,并建立Cd2+残留阻断ELISA检测方法.方法 用异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)螯合Cd2+合成Cd-ITCBE半抗原,异硫氰酯法制备免疫抗原Cd-ITCBE-BSA和检测抗原Cd-ITCBE-OVA,并进行鉴定;用Cd-ITCBE-BSA免疫BALB/c小鼠,经细胞融合后,间接ELISA和阻断ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备Cd2+单抗,并进行鉴定;建立检测Cd2+残留的阻断ELISA法,并进行验证.结果 Cd-ITCBE-BSA和Cd-ITCBE-OVA中BSA与OVA含量分别为7.1和6.7 mg/ml,Cd2+含量分别为191.7和130.1μg/ml;共筛选出1A3、287、2E10、4F3 4株杂交瘤细胞,其中2E10株分泌的cd舢单抗效价最高,细胞培养上清和腹水的间接ELISA效价分别达1:4.32×102和1:5.12×105,亲和常数(Ka)也最高,为7.58×108 L/mol,对Cd2+的半数抑制浓度(IC50)为16.3μg/L;建立的阻断ELISA法的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合;最低检测限为5μg/L;饲料样、猪尿样的平均添加回收率分别为92.9%和88%,平均变异系数分别为12.35%和12.45%;与Hg2+的交叉反应率为96.5%,与其他化合物未见交叉反应;试剂可在4℃保存180 d.结论已成功制备了高亲和力的Cd2+单抗,并建立了快速、简便、敏感、特异的Cd2+残留阻断ELISA检测方法.
镉、人工抗原、抗体、单克隆、酶联免疫吸附测定
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R392.33
河南省高校科技创新人才支持计划资助项目2010 HASTTT026
2011-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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