重组丙型肝炎病毒腺病毒载体疫苗rAd/E2的构建及鉴定

摘要：

目的 构建含丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)E2基因的复制缺陷型重组腺病毒载体疫苗,并进行鉴定.方法 以含HCV(1a亚型)E2基因的质粒pEGFP-HCV/E1E2为模板,PCR扩增E2基因,扩增产物与pGEM-T载体连接,测序正确后双酶切亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/E2,Pme Ⅰ酶切线性化后,与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌内同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd/E2,PacⅠ酶切线性化后,脂质体LipofectamineTM 2000介导转染HEK293细胞进行包装,获得重组腺病毒rAd/E2,在HEK293细胞内扩增,利用报告基因GFP的表达监测病毒包装及感染效率,PCR、RT-PCR和Westem blot对重组腺病毒进行鉴定,并测定各代病毒的滴度.结果 测序结果证明HCV E2基因序列正确;重组腺病毒质粒pAd/E2经酶切证明重组成功;PCR、RT-PCR及Western blot结果均证实重组腺病毒rAd/E2构建正确;第4代重组腺病毒的滴度为7.5×108 pfh/ml.结论已成功构建了重组HCV腺病毒rAd/E2,为丙型肝炎疫苗的研制提供了新的途径.

关键词：丙型肝炎病毒、E2基因、腺病毒载体

所属期刊栏目：24

分类号：R373.21;Q782(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：河北省科技支撑计划09276418D-5;河北省自然科学基金C2009001087

在线出版日期：2011-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：187-191