狂犬病病毒糖蛋白基因重组慢病毒载体的构建及鉴定

摘要：

目的 构建狂犬病病毒SRV9株糖蛋白基因重组慢病毒表达载体,并进行鉴定.方法 将狂犬病病毒SRV9株糖蛋白基因克隆至慢病毒载体pLVX-ZsGreen-IRES上,筛选阳性重组克隆.将质粒pLVX-ZsGreen-IRES-SRV9G、包膜质粒pMD2.G和包装质粒psPAX2共转染293T包装细胞系,通过荧光显微镜观察报告基因表达情况.收集上清,经浓缩后接种293T细胞,进行重组慢病毒感染细胞的鉴定;用限制性内切酶切除质粒pLVX-ZsGreen-IRES-SRV9G绿色荧光蛋白基因,采用直接免疫荧光试验检测狂犬病病毒糖蛋白的表达情况.结果 重组慢病毒表达载体经酶切和测序证明构建正确.荧光显微镜下可见重组慢病毒感染的293T细胞有大量绿色荧光出现,病毒滴度为3×107 IU/ml;直接免疫荧光检测表明,糖蛋白基因在293T细胞内获得有效表达.结论成功构建了狂犬病病毒SRV9株糖蛋白基因重组慢病毒载体,为狂犬病基因工程疫苗的研制奠定了基础.

关键词：狂犬病病毒、糖蛋白类、慢病毒、绿色荧光蛋白质类

所属期刊栏目：24

分类号：R373.9;Q782(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2011-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：130-132,140