体外拼装苦瓜降糖多肽P基因

摘要：

目的 以苦瓜降糖多肽P基因为例,探讨用寡核苷酸片段体外拼装基因的方法.方法 根据已知苦瓜降糖多肽P的蛋白序列和大肠杆菌的密码子偏爱性,反向翻译出可在大肠杆菌内表达的苦瓜降糖多肽P基因,设计24条40 bp的降糖多肽P基因寡核苷酸片段引物,通过PCR进行寡核苷酸片段的扩增和拼装.将拼装好的多肽P基因的cDNA与pET-32a载体连接后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+-NTA纯化后检测其对四氧嘧啶引起的糖尿病小鼠的降糖活性.结果 苦瓜降糖多肽P基因经2轮PCR扩增后,即可见目的 条带;经第3轮PCR扩增,即可见清晰的目的 条带.经测序鉴定,与设计的降糖多肽P基因序列完全一致.重组蛋白在E.coli BL21(DE3)中获得可溶性表达,且可与鼠抗His单抗发生特异性反应.纯化的融合蛋白纯度达90%以上,产量为10 mg/L,其对四氧嘧啶引起的糖尿病小鼠具有降糖活性.结论 体外基因拼装法是一种有效获取目的 基因的方法,可进行密码子偏爱性设计,在宿主系统中有效表达目的 基因.

关键词：基因拼装、苦瓜降糖多肽P、聚合酶链反应、密码子偏爱性

所属期刊栏目：24

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家十一五支撑计划2006BAI06A16 2007-2009

在线出版日期：2011-04-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：94-98