内源性血管生成抑制因子Arresten基因原核表达条件的优化

摘要：

目的 优化内源性血管生成抑制因子Arresten基因的原核表达条件.方法 从健康产妇的胎盘组织中提取总RNA,RT-PCR扩增Arresten基凶,构建重组表达质粒pBV220-Arr,分别转化感受态E. coli JM109、DH5α、BL21、BL21(DE3),诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物,筛选出最优表达菌种,并对其菌体培养温度和时间、诱导温度和时间及溶解氧量进行优化.结果 重组表达质粒pBV220-Arr经酶切及测序证明构建正确,重组表达质粒在E. coli JM109、DH5α、BL21、BL21(DE3)4种菌中诱导2和4 h.均能表达出Arresten蛋白,诱导表达4 h,E .coli BL21(DE3)目的 蛋白表达量最高,湿菌重也明显大于其他菌种.E. coli BL21(DE3)/pBV220-Arr的最佳表达条件为:在500 ml培养瓶中加入100 ml LB氨苄阳性培养基,菌体于30℃培养4 h后,再42℃诱导表达4 h.结论 优化了Arresten基因工程菌的表达条件,为重组Arresten蛋白的大量表达提供了参考.

关键词：Arresten、原核细胞、基因表达、大肠杆菌

所属期刊栏目：24

分类号：R73-3;Q786(肿瘤学)

资助基金：山西省科技攻关项目042082;山西省高校产业化项目20080017;山西省山西医科大学校青年基金02200817

在线出版日期：2011-04-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：52-55,60