HIV-1 HXB2株Tat核心碱性区多肽Tat38-61的原核表达及其免疫反应性
目的 构建HIV-1 Tat核心碱性区多肽Tat38-61重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白并进行纯化及免疫反应性检测.方法 采用PCR法从HIV-1 HXB2株Tat1-101基因中扩增编码Tat38-61的基因序列,克隆至原核表达载体pET32a(+)中,构建重组原核表达质粒pET32a(+)-Tat38-61转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经Ni2+-NTA柱亲和层析法纯化后,ELISA法鉴定其免疫反应性.结果 重组原核表达质粒pET32a(+)-Tat38-61经双酶切及测序表明构建正确;SDS-PAGE分析显示,在相对分子质量约21 300处可见目的 蛋白条带,表达量占菌体总蛋白的67.4%,主要以可溶形式表达;纯化后融合蛋白的纯度可达97%以上;ELISA结果显示,该融合蛋白与兔抗PEPTIDE-Tat1-101血清及HIV阳性血清均呈特异性反应.结论 已成功构建了HIV-1 Tat核心碱性区多肽Tat38-61的重组原核表达质粒,表达并纯化了PEl32a(+)-Tat38-61融合蛋白,该融合蛋白碱性区表位得到较好的保留,为Tat38-61噬菌体突变文库的构建及亲和筛选奠定了基础.
tat基因产物、人免疫缺陷病毒、核心碱性区、重组融合蛋白质类、原核细胞、基因表达、免疫反应性
24
R373.9;Q78(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家自然科学基金资助项目30872246;30972799;上海市基础研究重点项目08JC1405200
2011-04-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
10-13,24
