肝癌患者血浆端粒酶逆转录酶基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

目的 建立实时荧光定量PCR法检测肝癌患者血浆端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因水平.方法 提取人全血基因组DNA,常规PCR扩增hTERT基因,与pMD18-T载体连接,转化入大肠杆菌DH5α,提取重组质粒pMD18-T-hTERT作为定量检测的标准品,绘制实时荧光定量PCR标准曲线,并进行方法的验证.采用建立的实时荧光定量PCR法检测肝癌患者和健康人血浆中hTFRT DNA的水平.结果 重组质粒pMD18-T-hTERT经PCR及测序鉴定证明构建正确.以该重组质粒为标准品绘制的标准曲线在103～108 copies/μl浓度范围内线性关系良好,相关系数R2为0.997;批内及试验间变异系数分别为0.86%和1.44%;特异性良好.肝癌患者血浆hTERT DNA水平显著高于健康人(P＜0.05).结论 已成功建立了肝癌患者血浆hTERT DNA的实时荧光定量PCR检测方法,为临床通过检测血浆hTERT DNA辅助诊断肝癌提供了良好的工具.

关键词：实时荧光定量PCR、人类端粒酶逆转录酶基因、肝肿瘤

所属期刊栏目：23

分类号：R446.1(诊断学)

资助基金：重庆市卫生局科研项目04-2-155;05-2-125

在线出版日期：2011-03-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1380-1383