梅毒螺旋体特异性抗原TP17、TP0453的表达及以其作为诊断抗原的间接ELISA方法的建立
目的 表达、纯化梅毒螺旋体特异性外膜蛋白TP17和TP0453,并以其作为包被抗原,建立新型梅毒酶联免疫诊断方法.方法 PCR扩增TP17和TP0453基因,分别克隆入pET-22b(+)和pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-22b(+)-TP17和pET-28a(+)-TP0453,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物纯化后进行Western blot鉴定.以纯化的重组TP17和TP0453蛋白作为诊断抗原,建立间接ELISA方法,并对该方法进行验证.结果 PCR分别扩增出500和800 bp的TP17和TP0453基因片段,测序结果与GenBank中登录的CDS序列完全一致.重组表达质粒pET-22b(+)-TP17和pET-28a(+)-TP0453经双酶切鉴定正确;重组TP17和TP0453蛋白的相对分子质量分别约为18 000和29 000.表达量分别约占菌体总蛋白的18%和24%,纯化的重组TP17和TP0453蛋白的纯度分别＞95%和＞90%.两种重组蛋白均能与梅毒标准血清发生特异性反应.检测70份梅毒参考血清和定值质控血清的批内变异系数(CV)≤4.35%,批间CV≤6.69%,表明精密性良好;对国家标准血清盘的检测灵敏度为94.4%,特异性为97.1%,符合率为95.7%,最低检出限为0.25 NCU/ml.结论 表达和纯化的重组TP17和TP0453蛋白具有良好的抗原性和特异性,可用于梅毒血清学诊断.
梅毒、密螺旋体属、细菌外膜蛋白质类、基因表达、酶联免疫吸附测定
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R377+.1;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
2011-03-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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