结核分枝杆菌PPE68蛋白的原核表达及纯化

摘要：

目的 构建结核分枝杆菌PPE68基因的原核表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达和纯化.方法 以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR法扩增PPE68基因,将其克隆至pET-32a(+)载体中,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)-PPE68,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,进行纯化.结果 重组表达质粒pET-32a(+)-PPE68经PCR及双酶切鉴定构建正确,测序结果与GenBank中登录的PPE68基因序列一致.表达的TrxPPE68融合蛋白相对分子质量约为57 000,表达量约占菌体总蛋白的41%,可与结核分枝杆菌免疫小鼠血清发生特异性反应.纯化的重组蛋白纯度约为93%.结论 已成功构建了结核分枝杆菌PPE68基因重组原核表达质粒pET-32a(+)-PPE68,原核表达并纯化了重组蛋白,为PPE68作为结核病特异性诊断抗原的开发及重组BCG疫苗的研制奠定了基础.

关键词：结核分枝杆菌、PPE68、原核细胞、基因表达、纯化

所属期刊栏目：23

分类号：R378.91+1;Q78(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30771922;30901280;重庆市自然科学基金2009BB5275

在线出版日期：2011-03-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1295-1298