CHO宿主细胞DNA残留量检测方法的建立

摘要：

目的 建立检测生物制品中CHO宿主细胞DNA残留量的方法,制备检测CHO细胞DNA残留量的内部参考品,为国家相关标准的制定和修订提供依据.方法 分别采用酚:氯仿:异戊醇抽提、DNA提取试剂盒和高盐抽提3种方法提取CHO细胞DNA,比较3种方法的提取效果;用地高辛标记最佳方法提取的CHO细胞DNA探针,并优化标记体系,直接法检测探针的标记效率;采用3种方法处理CHO细胞DNA内部参考品(1组不作处理;2组加入牛血清白蛋白和蛋白酶K;3组按2组方法处理后,增加DNA抽提步骤),通过点杂交法,用标记的探针检测上述样品的灵敏度.结果 高盐抽提法提取的CHO细胞DNA效果较好;体系4(DNA 10μg,Vial4.16 μl,总体积64μl)标记效率最高;经不同方法处理的1、2、3组CHO细胞DNA内部参考品的检测灵敏度分别为1 pg、10 pg和1 ng.结论 建立的地高辛标记CHO细胞DNA探针-点杂交检测CHO细胞DNA残留量的方法稳定可靠,可用于生物制品中CHO宿主细胞DNA残留量的检测.

关键词：CHO细胞、残留DNA、地高辛、探针、点杂交

所属期刊栏目：23

分类号：Q75(分子遗传学)

在线出版日期：2011-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1264-1266