铁载体受体蛋白IroN的原核表达及其对肠道外致病性大肠杆菌感染小鼠的免疫保护作用

摘要：

目的 原核表达重组铁载体受体蛋白IroN,并探讨其对小鼠肠道外致病性大肠杆菌群(Extraintestinal pathogenic E. coli,ExPEC)感染的免疫保护作用.方法 从E. coli J96基因组DNA中扩增IroN基因,克隆入原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达质粒pET-32a-IroN,转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组IroN蛋白纯化后,经皮下免疫BALB/c小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清和尿液中的抗体水平;以E. coli J96菌株分别经腹腔和尿道途径攻击免疫小鼠,计算保护率并计数细菌数.结果 重组IroN蛋白的表达量为32%,纯化后纯度超过85%,且具有良好的反应原性.重组IroN蛋白经皮下免疫小鼠,可诱导小鼠血清产生高水平的特异性IgG抗体,在尿液中未检测到特异性IgA抗体.重组IroN蛋白对腹腔攻击ExPEC感染小鼠的保护率为81.8%(P<0.05);重组IroN蛋白免疫的小鼠经尿道攻击ExPEC后,肾脏分离的菌落数比对照组(PBS免疫)降低了100倍以上(P<0.05),但膀胱和尿液中的菌落数两组差异无统计学意义(P>0.05).结论 已原核表达并纯化了IroN蛋白,其对ExPEC感染小鼠的腹腔和肾脏具有显著的保护作用,但对膀胱感染无保护作用.

关键词：肠道外致病性大肠杆菌、铁载体受体蛋白、原核细胞、基因表达、免疫保护

所属期刊栏目：23

分类号：Q786;R978(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2011-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1193-1197