圆弧青霉碱性脂肪酶在毕赤酵母中的高效表达

摘要：

目的 在毕赤酵母(Pichia pastoris)中高效表达圆弧青霉碱性脂肪酶(Alkaline lipase,Lip I).方法 采用RT-PCR法从圆弧青霉PG37中扩增lip Ⅰ基因的cDNA片段,克隆入表达质粒pPIC9K中,构建重组表达质粒pPIC9K.t/p I,转化入毕赤酵母GS115,筛选高拷贝重组子GS115/tip Ⅰ,甲醇诱导表达,并对诱导表达条件进行初步优化.结果 GS115/lip Ⅰ在培养基初始pH 6.0,甲醇添加量1.0%的BMMY培养基中,于30～C诱导96 h,发酵液上清中Lip Ⅰ的活性为10.5 U/ml.在培养基初始pH 9.0.甲醇添加量1.0%的BMMY培养基中,24℃诱导120 h,GSll5/lip Ⅰ发酵液上清中Lip Ⅰ的活性最高,达407 U/ml.结论 在毕赤酵母GSI 15中高效表达了具有活性的圆弧青霉Lip Ⅰ.

关键词：圆弧青霉PG37、脂肪酶、毕赤酵母、基因表达

所属期刊栏目：23

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目20776061

在线出版日期：2011-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1185-1189