Tgo DNA聚合酶的表达、纯化及其扩增性能

摘要：

目的 表达、纯化Tgo DNA聚合酶,并检测其扩增性能.方法 采用PCR技术从嗜热古细菌Thermococcus伊学一onarius中扩增Tgo DNA聚合酶基因,并克隆至含His-Tag靶序列的pETl01载体中,转化E coli BL21 Star(DE3),IPTG诱导表达.目的蛋白纯化后经SDS.PAGE分析,并利用标准pfu酶,采用对比法初略测定酶活性;以质粒pUCl9为模板,用Tgo酶和pfu酶进行PCR扩增,比较二者的扩增效率,采用改进的蓝白试验法检测Tgo酶的扩增忠实性.结果 PCR扩增的Tgo DNA聚合酶基因大小约2 300 bp.根据测序获得的基因序列推导出的氨基酸序列与GenBank中公布的序列一致.表达的目的蛋白为可溶性蛋白,相对分子质最约为89 000.表达量为350斗g/g E coli,50%甘油保存的酶活性约为5 U/μl.Tgo 酶和pfu酶的扩增产出率和忠实性均相当.结论 成功表达并纯化了Tgo DNA聚合酶,其扩增性能与pfu酶相当.

关键词：Tgo DNA聚合酶、基因表达、纯化、扩增性能

所属期刊栏目：23

分类号：Q559(酶)

资助基金：国际合作项目20062200135;吉林省自然科学基金项目20060723

在线出版日期：2011-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1182-1184,1189