靶向人Gadd45α基因的shRNA慢病毒载体对缺氧致人脐静脉内皮细胞生物学功能损伤的影响

摘要：

目的 研究靶向人生长阻滞和DNA损伤450t(Growth arrest and DNA damage 45 alpha,Gadd45a)基因和表达绿色荧光蛋白(Green fluorescert protein,GFP)的shRNA慢病毒载体对缺氧致人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)表达上调的Gadd45a的沉默作用,初步阐明Gadd45a在缺氧应激致HUVECs生物学功能损伤过程中的作用.方法 慢病毒包装后感染HUVECs,筛选最适MOI及感染时间.感染72 h后,采用Real-time PCR和Western blot检测细胞中Gadd45a mRNA和蛋白的表达;流式细胞术检测细胞的凋亡率;Transwell小室实验检测细胞的迁移率;ELISA检测细胞sFh.1和sEng的分泌水平.结果 包装后慢病毒载体的滴度为1×108 TU/ml,最适MOI为20,最适感染时间为72 h,对HUVECs的感染效率约为80%.Gadd450t shRNA慢病毒载体对Gadd45a基闪的沉默效率可达80%,阴性对照慢病毒载体对Gadd45a的表达无抑制作用.缺氧可致HUVECs中Gadd45ct的表达上调,靶向Gadd45a基因的shRNA慢病毒颗粒可有效抑制缺氧致HUVECs的凋亡,减少sFlt-1及sEng的释放.同时增强其体外迁移能力,与缺氧组相比,差异具有统计学意义(P<0.05). Gadd45a蛋白的表达水平与sFlt-1及sEng的分泌水平呈正相关(r1=0.89,r2=0.77,P均<0.05).结论 沉默Gadd45a基因对缺氧应激条件下的HUVECs生物学功能具有保护作用;Gadd45et可能是一个关键上游位点,参与子痫前期时sFlt-1及sEng的释放.

关键词：生长阻滞和DNA损伤45α基因、RNA干扰、慢病毒载体、缺氧、人脐静脉内皮细胞、sFlt-1、sEng、子痫

所属期刊栏目：23

分类号：Q26(细胞生物化学)

资助基金：国家自然科学基金81070502

在线出版日期：2011-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1168-1172