重组结核杆菌Ag85a-ESAT6融合蛋白的原核表达、纯化及其生物活性

摘要：

目的 原核表达、纯化重组结核杆菌Ag85a-ESAT6融合蛋白.并检测其生物活性.方法 将Ag85a-ESAT6融合基因片段插入pET-28a(+)载体中,构建重组质粒pET-28a.Ag85a.ESAT6.转化大肠杆菌B127I(DE3),IPTG诱导表达.表达产物在变性条件下经Ni.琼脂糖凝胶层析柱纯化复性后,在体外对经5种不同类型的表达结核杆菌Ag85a和ESAT6的重组痘苗病毒免疫的小鼠脾淋巴细胞进行刺激,以MTT法检测脾淋巴细胞的增殖反应.结果 重组质粒pET.28a-Ag85a-ESAT6经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约41 000,主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的55.65%;纯化复性的重组融合蛋白纯度达95%以上.表达量约为1.2 g/L发酵液,且具有良好的反应原性;与空痘苗病毒或生理盐水免疫的小鼠相比,5种重组痘苗病毒免疫的小鼠脾淋巴细胞与Ag85a-ESAT6融合蛋白共培养后,增殖活性明显升高(P<0.01).结论 成功利用原核系统表达了结核杆菌Ag85a.ESAT6融合蛋白,纯化复性的Ag85a.ESAT6融合蛋白具有生物学活性.

关键词：分枝杆菌、结核、Ag85a、ESAT6、原核细胞、基因表达、生物活性

所属期刊栏目：23

分类号：R378.91+1;Q78(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：科技重大专项基金2008ZX10003-013

在线出版日期：2011-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1153-1157